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血漿中水楊酸的HPLC測定法

更新時間:2015-06-01點擊次數(shù):1291

血漿中水楊酸的HPLC測定法


一、目的要求

1、掌握血液樣品前處理方法

2、掌握回收率測定方法和計算方法、

二、主要儀器和藥品。

 液相色譜儀,ODS分析柱,水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品,空白血漿,標(biāo)準(zhǔn)血樣。

三、實驗方法

水楊酸(Salicylic Acid)

水楊酸69-72-7

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(150mm x 4.6mm,5um)流動相:甲醇-磷酸二氫鉀(10mmol/L,ph3.0)(5:5):流速1ml/min:檢測波長230nm:進(jìn)樣體積20uL.理論板數(shù)以水楊酸峰計不低于2000.

血漿中水楊酸回收率測定:取水楊酸標(biāo)準(zhǔn)品適量,加甲醇溶解并稀釋成0.5mg/mL的對照品溶液,取適量用流動相稀釋成20ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液。另取空白血漿0.4ml,加入25ul水楊酸對照品溶液,漩渦混勻,加入0.2ml6%高氯酸沉淀蛋白,10000r/min離心10min,取上清液作為樣品測定液。同法制備血漿空白液,取對照品稀溶液,樣品測定液和需將空白頁各20ul、進(jìn)行,記錄色譜圖。

回收率計算:根據(jù)對照品稀溶液濃度,峰面積和樣品測定液峰面積,水楊酸加入量,計算回收率。對照品稀溶液濃度C對=20ug/ml,樣品測定液中加入的水楊酸濃度Cm=(0.023 x 500)/(0.4+0.2+0.025)=20ug/ml,所以血漿中水楊酸回收=A樣/A對 x 100%

四、注意事項

1、標(biāo)準(zhǔn)品溶液與樣品液必須分別重復(fù)進(jìn)行三次,取平均峰面積進(jìn)行計算。

2、外標(biāo)法測定含量,樣品處理中應(yīng)嚴(yán)格定量操作。

3、為獲得高的精密度,驚醒量必須大于定量環(huán)容積的2-3倍

標(biāo)準(zhǔn)品