青島捷世康生物科技有限公司分享影響化學(xué)發(fā)光面議分析的因素

1、樣品的渾濁度可以測定的靈敏度降低。這主要是因為多數(shù)分光光度計只能測出樣品中發(fā)射出的中能量，不包括散射光。樣品本身的混度高，不僅可以出現(xiàn)一定的吸光度

2、反應(yīng)體系的PH值也與檢測結(jié)果密切相關(guān)，反應(yīng)物的顏色可隨著ph值而變化，而顏色的深淺又支架影響著吸光度。當(dāng)ph值增高有助于提高魯米諾衍生物的發(fā)光強度，但同時較高的PH值又容易引起抗原抗體復(fù)合物的解離。標(biāo)準(zhǔn)品

3、發(fā)光反應(yīng)的實現(xiàn)與溫度有密切的關(guān)系。實驗溫度的變化不僅影響反應(yīng)的速率，而且使光譜移動，對發(fā)光素酶類反應(yīng)來說，zui合適的反應(yīng)溫度為25-28攝氏度。

4、在發(fā)光素素酶參與反應(yīng)中，高濃度的鹽類和緩沖液可以抑制酶的活性，對發(fā)光反應(yīng)起干擾作用。

5、血清中的某些發(fā)光成分（如腺嘌呤核苷酸）和能直接引起發(fā)光反應(yīng)的酶類（如細(xì)胞色素氧化酶），也可能成為干擾因素。因此，再利用固相法檢測試驗時，加待檢血清樣品，反應(yīng)后應(yīng)充分洗滌，以消除這類干擾因素。

6、試驗中酶-結(jié)合抗體與故鄉(xiāng)載體量的多少。

親和素-生物素系統(tǒng)

親和素是由雞卵蛋白中提取的，分子量為680000Da，由4個亞單位組成的，對生物素具有高度的親和性，一個親和素分子可以牢固結(jié)合四個生物素分子。

生物素為244.2Da的小分子物質(zhì)，也稱為維生素H，同時也是羧基轉(zhuǎn)化酶，故又稱為輔酶R。生物素分子上的羧基經(jīng)過化學(xué)修飾后，可以導(dǎo)入各種蛋白質(zhì)分子（抗原或抗體）或酶分子中。導(dǎo)入生物素的抗原或抗體，其性質(zhì)不變；導(dǎo)入生物素的酶分子，其催化活性也保持不變或稍有降低

親和素-生物素系統(tǒng)是通過親和素對生物素的高度親和力，與導(dǎo)入了生物素的酶分子切切結(jié)合，形成晶格樣復(fù)合物，這個復(fù)合物上的親和素還可同導(dǎo)入生物素的特異性抗體結(jié)合，再去鏈接相應(yīng)的抗原，經(jīng)酶催化底物呈色，這樣就可以測定抗原和抗體。

親和素-生物素系統(tǒng)的檢測方法可分為：親和素-生物素家架橋法、標(biāo)記親和素-生物素法和親和素-生物素復(fù)合物法。

親和素-生物素系統(tǒng)的特點是

1、生物素的分子量比較小，導(dǎo)入抗體分子之后，抗體的分子量和特異性變化均不大

2、生物素分子與酶分子或抗體之間結(jié)合的方法操作簡便，結(jié)合牢固可靠、未結(jié)合的游離生物素容易通過簡答的透析方法除去。

3、親和素-生物素系統(tǒng)的試劑穩(wěn)定性好。

4、親和素-生物素的親和力高，一般來說較抗炎抗體之間的親和力要高100萬倍左右，而且酸堿變性劑、蛋白溶解酶及有機溶劑均不影響親和素與生物素之間的結(jié)合作用

親和素-生物素系統(tǒng)的應(yīng)用主要有：

1、酶、熒光和放射免疫的測定，主要對象為可溶性細(xì)菌抗原、病毒抗原和腫瘤相關(guān)抗原及其相應(yīng)的抗體。他可以顯著提高檢測的靈敏度，放大抗體的效價。

2、細(xì)胞表面紛紛（抗原、抗體和其他表面結(jié)構(gòu)）的測定和定位。以及免疫組織化學(xué)染色。

3、以生物素化核苷酸做干鎮(zhèn)，進(jìn)行核算雜交和基因圖譜分析。

4、在單克隆抗體的檢測和篩選，免疫印跡法和共帽化分析中代替常規(guī)試劑。

5、制備抗原和看題的免疫吸附柱，純化相應(yīng)的配體。

6、分離細(xì)胞表面抗原核受體

7、與細(xì)胞熒光分析儀聯(lián)用以分離細(xì)胞及其亞群。

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